Osteoartritas (OA) yra viena iš ilgalaikių lėtinių degeneracinių kaulų ir sąnarių ligų, kuria serga vyresni nei 65 metų žmonės.
1Paprastai osteoartritu sergantiems pacientams diagnozuojamas pažeistas kremzlės audinys, uždegiminė sinovinė plėvelė ir eroduoti chondrocitai, kurie sukelia skausmą ir fizinį diskomfortą [
2Artritinį skausmą daugiausia sukelia sąnarių kremzlės degeneracija dėl uždegimo, o kai kremzlė yra smarkiai pažeista, kaulai gali susidurti vienas su kitu, sukeldami nepakeliamą skausmą ir fizinį diskomfortą [
3Uždegiminių mediatorių dalyvavimas, sukeliantis tokius simptomus kaip sąnario skausmas, patinimas ir sustingimas, yra gerai dokumentuotas. OA sergantiems pacientams sinoviniame skystyje randami uždegiminiai citokinai, kurie sukelia kremzlės ir subchondrinio kaulo eroziją [
4]. Du pagrindiniai nusiskundimai, kuriais paprastai skundžiasi OA sergantys pacientai, yra skausmas ir sinovijos uždegimas. Todėl pagrindiniai dabartinių OA gydymo būdų tikslai yra sumažinti skausmą ir uždegimą.
5Nors prieinami osteoartrito gydymo metodai, įskaitant nesteroidinius ir steroidinius vaistus, veiksmingai malšina skausmą ir uždegimą, ilgalaikis šių vaistų vartojimas turi rimtų pasekmių sveikatai, tokių kaip širdies ir kraujagyslių sistemos, virškinimo trakto ir inkstų funkcijos sutrikimai [
6Todėl osteoartrito gydymui reikia sukurti veiksmingesnį vaistą, turintį mažiau šalutinių poveikių.
Natūralūs sveikatos produktai tampa vis populiaresni dėl jų saugumo ir lengvo prieinamumo [
7Tradiciniai korėjiečių vaistai įrodė veiksmingumą gydant įvairias uždegimines ligas, įskaitant artritą [
8Aucklandia lappa DC. yra žinoma dėl savo gydomųjų savybių, tokių kaip či cirkuliacijos gerinimas, malšinantis skausmą ir raminantis skrandį, ir tradiciškai naudojama kaip natūralus analgetikas [
9Ankstesnėse ataskaitose teigiama, kad A. lappa pasižymi priešuždegiminiu poveikiu [
10,
11], skausmą malšinantis vaistas [
12], priešvėžinis [
13] ir skrandžio apsauginis [
14] poveikis. Įvairų A. lappa biologinį aktyvumą lemia pagrindiniai jos aktyvūs junginiai: kostunolidas, dehidrokostunolidas, dihidrokostunolidas, kostuslaktonas, α-kostolis, sausšerijos laktonas ir kostuslaktonas [
15Ankstesni tyrimai teigia, kad kostunolidas pasižymi priešuždegiminėmis savybėmis lipopolisacharide (LPS), kurios indukuoja makrofagus reguliuodamos NF-kB ir šilumos šoko baltymo kelią [
16,
17Tačiau nebuvo atlikta jokių tyrimų, kuriuose būtų nagrinėjamas galimas A. lappa aktyvumas gydant OA. Šiame tyrime buvo tiriamas A. lappa terapinis poveikis OA, naudojant (mononatrio jodoacetato) MIA ir acto rūgšties sukeltus graužikų modelius.
Mononatrio jodoacetatas (MIA) yra žinomas kaip naudojamas sukelti daugelį skausmo sukeliančių elgsenos sutrikimų ir patofiziologinių OA požymių gyvūnams [1].
18,
19,
20Sušvirkštas į kelio sąnarius, MIA sutrikdo chondrocitų metabolizmą ir sukelia uždegimą bei uždegiminius simptomus, tokius kaip kremzlės ir subchondrinio kaulo erozija – pagrindiniai OA simptomai [
18Acto rūgštimi sukeltas raitymosi atsakas plačiai laikomas periferinio skausmo simuliacija gyvūnams, kai uždegiminį skausmą galima kiekybiškai išmatuoti [
19Pelių makrofagų ląstelių linija RAW264.7 yra plačiai naudojama ląstelių atsakams į uždegimą tirti. Aktyvuoti LPS, RAW264 makrofagai aktyvuoja uždegimo kelius ir išskiria kelis uždegimo tarpininkus, tokius kaip TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ir IL-6 [].
20Šiame tyrime buvo įvertintas A. lappa antinociceptinis ir priešuždegiminis poveikis OA MIA gyvūnų modelyje, acto rūgšties sukelto gyvūnų modelyje ir LPS aktyvuotose RAW264.7 ląstelėse.
2. Medžiagos ir metodai
2.1. Augalinė medžiaga
Eksperimente naudota džiovinta A. lappa DC. šaknis buvo įsigyta iš „Epulip Pharmaceutical Co., Ltd.“ (Seulas, Korėja). Ją identifikavo Gachono universiteto Korėjos medicinos pulkininko, Vaistažolių farmakologijos katedros prof. Donghun Lee, o deponuoto kvito pavyzdžio numeris yra 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakto HPLC analizė
A. lappa buvo ekstrahuota naudojant grįžtamojo srauto aparatą (distiliuotas vanduo, 3 val. 100 °C temperatūroje). Ekstrahuotas tirpalas buvo filtruojamas ir kondensuojamas naudojant žemo slėgio garintuvą. A. lappa ekstrakto išeiga po šaldymo džiovinimo -80 °C temperatūroje buvo 44,69 %. A. lappa chromatografinė analizė atlikta naudojant HPLC, prijungtą prie 1260 InfinityⅡ HPLC sistemos (Agilent, Pal Alto, CA, JAV). Chromatiniam atskyrimui buvo naudojama EclipseXDB C18 kolonėlė (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) 35 °C temperatūroje. Iš viso 100 mg mėginio buvo praskiesta 10 ml 50 % metanolio ir sonikuota 10 min. Mėginiai buvo filtruojami 0,45 μm švirkšto filtru (Waters Corp., Milford, MA, JAV). Mobiliosios fazės sudėtis buvo 0,1 % fosforo rūgšties (A) ir acetonitrilo (B), o kolonėlė buvo eliuota taip: 0–60 min., 0 %; 60–65 min., 100 %; 65–67 min., 100 %; 67–72 min., 0 % tirpiklio B, srauto greitis 1,0 ml/min. Ištekantis skystis buvo stebimas esant 210 nm bangos ilgiui, įpurškiant 10 μl tūrį. Analizė atlikta trimis egzemplioriais.
2.3. Gyvūnų laikymas ir tvarkymas
5 savaičių amžiaus Sprague–Dawley (SD) žiurkių patinėliai ir 6 savaičių amžiaus ICR pelių patinėliai buvo įsigyti iš „Samtako Bio Korea“ (Gyeonggi-do, Korėja). Gyvūnai buvo laikomi patalpoje, kurioje buvo palaikoma pastovi temperatūra (22 ± 2 °C) ir drėgmė (55 ± 10 %), o šviesos ir tamsos ciklas buvo 12/12 val. Gyvūnai buvo pratinami su sąlygomis daugiau nei savaitę prieš pradedant eksperimentą. Gyvūnams buvo tiekiamas neribotas pašaro ir vandens kiekis. Visose eksperimentinėse procedūrose su gyvūnais buvo griežtai laikomasi Gachono universiteto galiojančių gyvūnų priežiūros ir elgesio su jais etikos taisyklių (GIACUC-R2019003). Tyrimas buvo suplanuotas kaip tyrėjui aklas ir lygiagretus tyrimas. Eutanazijos metodas buvo taikomas pagal Gyvūnų eksperimentinės etikos komiteto gaires.
2.4. MIA injekcija ir gydymas
Žiurkės atsitiktinai buvo suskirstytos į 4 grupes: kontrolinę, kontrolinę, indometacino ir A. lappa. Anestezuojant 2 % izofluorano O2 mišiniu, žiurkėms į kelio sąnarius buvo sušvirkšta 50 μL MIA (40 mg/m2; „Sigma-Aldrich“, Sent Luisas, Misūris, JAV), siekiant sukelti eksperimentinį osteoartritą (OA). Gydymas buvo atliktas taip: kontrolinė ir kontrolinė grupės buvo šeriamos tik pagrindiniu AIN-93G pašaru. Tik indometacino grupei buvo duodamas indometacinas (3 mg/kg), įtrauktas į AIN-93G pašarą, o A. lappa 300 mg/kg grupei buvo priskirtas AIN-93G pašaras, papildytas A. lappa (300 mg/kg). Gydymas buvo tęsiamas 24 dienas nuo OA indukcijos dienos, duodant po 15–17 g 190–210 g kūno svorio per parą.
2.5. Svorio guolio matavimas
Po osteoartrito sukėlimo žiurkių užpakalinių galūnių svorio metimo pajėgumas buvo išmatuotas naudojant „Incapacitance-MeterTester600“ (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, JAV), kaip numatyta. Buvo apskaičiuotas svorio pasiskirstymas ant užpakalinių galūnių: svorio metimo pajėgumas (%)
