Osteoartritas (OA) yra viena iš ilgalaikių lėtinių degeneracinių kaulų sąnarių ligų, kuri paveikia vyresnius nei 65 metų žmones.
1]. Paprastai OA pacientams diagnozuojama pažeista kremzlė, sinovijos uždegimas ir eroduoti chondrocitai, kurie sukelia skausmą ir fizinį išgyvenimą.
2]. Artritinį skausmą dažniausiai sukelia sąnarių kremzlės degeneracija dėl uždegimo, o kai kremzlė yra rimtai pažeista, kaulai gali susidurti vienas su kitu, sukeldami nepakeliamą skausmą ir fizinius sunkumus.
3]. Uždegiminių mediatorių, pasireiškiančių tokiais simptomais kaip skausmas, patinimas ir sąnario sustingimas, dalyvavimas yra gerai dokumentuotas. OA sergantiems pacientams sinoviniame skystyje randami uždegiminiai citokinai, sukeliantys kremzlės ir subchondralinio kaulo eroziją.
4]. Du pagrindiniai OA pacientų nusiskundimai yra skausmas ir sinovijos uždegimas. Todėl pagrindiniai dabartinių OA terapijų tikslai yra sumažinti skausmą ir uždegimą. [
5]. Nors turimi OA gydymo būdai, įskaitant nesteroidinius ir steroidinius vaistus, įrodė veiksmingumą malšinant skausmą ir uždegimą, ilgalaikis šių vaistų vartojimas turi rimtų pasekmių sveikatai, pvz., širdies ir kraujagyslių, virškinimo trakto ir inkstų funkcijos sutrikimus.
6]. Taigi osteoartritui gydyti turi būti sukurtas veiksmingesnis vaistas, turintis mažiau šalutinių poveikių.
Natūralūs sveikatos produktai tampa vis populiaresni, nes yra saugūs ir lengvai prieinami [
7]. Įrodytas tradicinių korėjiečių vaistų veiksmingumas nuo kelių uždegiminių ligų, įskaitant artritą.
8]. Oklandijos lappa DC. yra žinomas dėl savo gydomųjų savybių, tokių kaip qi cirkuliacijos gerinimas, siekiant sumažinti skausmą ir nuraminti skrandį, ir buvo tradiciškai naudojamas kaip natūralus analgetikas [
9]. Ankstesnėse ataskaitose teigiama, kad A. lappa turi priešuždegiminių savybių.
10,
11], analgetikas [
12], priešvėžinis [
13] ir skrandžio apsaugą [
14] efektai. Įvairią A. lappa biologinę veiklą lemia pagrindiniai jo aktyvūs junginiai: kostunolidas, dehidrokostulaktonas, dihidrokostunolidas, kostuslaktonas, α-kostolas, saussurea laktonas ir kostulaktonas.
15]. Ankstesni tyrimai teigia, kad kostunolidas pasižymėjo priešuždegiminėmis lipopolisacharido (LPS) savybėmis, kurios sukėlė makrofagus reguliuodamas NF-kB ir šilumos šoko baltymų kelią.
16,
17]. Tačiau jokiame tyrime nebuvo ištirtas galimas A. lappa aktyvumas gydant OA. Šiame tyrime buvo tiriamas A. lappa terapinis poveikis OA, naudojant (mononatrio jodoacetato) MIA ir acto rūgšties sukeltus graužikų modelius.
Mononatrio jodoacetatas (MIA) plačiai naudojamas daugeliui gyvūnų skausmo elgesio ir OA patofiziologinių savybių sukelti.
18,
19,
20]. Sušvirkštas į kelio sąnarius, MIA sutrikdo chondrocitų apykaitą ir sukelia uždegimą bei uždegiminius simptomus, tokius kaip kremzlės ir subchondralinio kaulo erozija, pagrindiniai OA simptomai.
18]. Acto rūgštimi sukeltas vingiavimo atsakas plačiai laikomas gyvūnų periferinio skausmo modeliavimu, kai uždegiminį skausmą galima kiekybiškai išmatuoti.
19]. Pelės makrofagų ląstelių linija RAW264.7 populiariai naudojama tiriant ląstelių atsaką į uždegimą. Suaktyvinus LPS, RAW264 makrofagai suaktyvina uždegiminius kelius ir išskiria keletą uždegimo tarpininkų, tokių kaip TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ir IL-6.
20]. Šiame tyrime buvo įvertintas antinocicepcinis ir priešuždegiminis A. lappa poveikis prieš OA MIA gyvūnų modelyje, acto rūgšties sukeltas gyvūnų modelis ir LPS aktyvuotos RAW264.7 ląstelės.
2. Medžiagos ir metodai
2.1. Augalinė medžiaga
Džiovinta A. lappa DC šaknis. eksperimente naudotas buvo įsigytas iš Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seulas, Korėja). Jį nustatė Gachono universiteto Žolelių farmakologijos katedros profesorius Donghunas Lee, Korėjos medicinos pulkininkas, o kupono pavyzdžio numeris buvo deponuotas kaip 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakto HPLC analizė
A. lappa buvo ekstrahuotas naudojant refliukso aparatą (distiliuotas vanduo, 3 val. 100 °C temperatūroje). Ekstrahuotas tirpalas filtruojamas ir kondensuojamas naudojant žemo slėgio garintuvą. A. lappa ekstrakto išeiga buvo 44,69 % po džiovinimo šalčiu temperatūroje –80 °C. A. lappa chromatografinė analizė buvo atlikta naudojant HPLC, prijungtą naudojant 1260 InfinityⅡ HPLC sistemą (Agilent, Pal Alto, CA, JAV). Chromatiniam atskyrimui buvo naudojama EclipseXDB C18 kolonėlė (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) esant 35 °C temperatūrai. Iš viso 100 mg mėginio buvo praskiesta 10 ml 50% metanolio ir 10 min. Mėginiai buvo filtruojami 0,45 μm švirkštiniu filtru (Waters Corp., Milford, MA, JAV). Mobiliosios fazės sudėtis buvo 0,1 % fosforo rūgšties (A) ir acetonitrilo (B), o kolonėlė eliuuojama taip: 0–60 min., 0 %; 60–65 min, 100 %; 65–67 min., 100 %; 67–72 min., 0% tirpiklis B, tėkmės greitis 1,0 ml/min. Nuotekos buvo stebimos esant 210 nm, naudojant 10 μL įpurškimo tūrį. Analizė buvo atlikta trimis egzemplioriais.
2.3. Gyvūnų laikymas ir tvarkymas
5 savaičių amžiaus Sprague-Dawley (SD) žiurkių patinai ir 6 savaičių ICR pelių patinai buvo įsigyti iš Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korėja). Gyvūnai buvo laikomi patalpoje, naudojant pastovią temperatūrą (22 ± 2 °C) ir drėgmę (55 ± 10%) bei 12/12 valandų šviesos / tamsos ciklą. Gyvūnai buvo supažindinti su būkle daugiau nei savaitę prieš pradedant eksperimentą. Gyvūnai turėjo ad libitum pašarų ir vandens tiekimą. Visose eksperimentinėse su gyvūnais procedūrose buvo griežtai laikomasi dabartinių Gachono universiteto etikos taisyklių dėl gyvūnų priežiūros ir tvarkymo (GIACUC-R2019003). Tyrimas buvo sukurtas tyrėjo aklu būdu ir lygiagrečiai. Vadovavomės eutanazijos metodu pagal Eksperimentų su gyvūnais etikos komiteto gaires.
2.4. MIA injekcijos ir gydymas
Žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes, ty netikras, kontrolines, indometacino ir A. lappa. Anestezuojant 2% izofluorano O2 mišiniu, žiurkėms buvo įšvirkščiama 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, Sent Luisas, MO, JAV) į kelio sąnarius, kad būtų atlikta eksperimentinė OA. Gydymas buvo atliktas taip: kontrolinės ir fiktyvios grupės buvo palaikomos tik su AIN-93G pagrindine dieta. Tik indometacino grupei buvo suteiktas indometacinas (3 mg/kg), įtrauktas į AIN-93G dietą, o A. lappa 300 mg/kg grupė buvo priskirta AIN-93G dietai, papildytai A. lappa (300 mg/kg). Gydymas buvo tęsiamas 24 dienas nuo OA indukcijos dienos 15–17 g 190–210 g kūno svorio kasdien.
2.5. Svorio guolio matavimas
Po OA indukcijos, kaip numatyta, žiurkių užpakalinių galūnių svorio matavimas buvo atliktas nepajėgumo-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, JAV). Apskaičiuotas svorio pasiskirstymas ant užpakalinių galūnių: laikomoji galia (%)
