Grynas Saposhnikovia divaricata aliejus žvakėms ir muilui gaminti, didmeninis difuzorius, naujas nendrinių degiklių difuzoriams.
trumpas aprašymas:
2.1. SDE paruošimas
Džiovintos SD šakniastiebiai buvo įsigyti iš „Hanherb Co.“ (Guri, Korėja). Augalinės medžiagos taksonomiją patvirtino dr. Go-Ya Choi iš Korėjos Rytų medicinos instituto (KIOM). Egzempliorius (numeris 2014 SDE-6) buvo deponuotas Korėjos standartinių žolelių išteklių herbariume. Džiovinti SD šakniastiebiai (320 g) buvo du kartus ekstrahuoti 70 % etanoliu (2 val. virinant su grįžtamuoju šaldytuvu), o ekstraktas buvo sukoncentruotas sumažintame slėgyje. Nuoviras buvo filtruojamas, liofilizuotas ir laikomas 4 °C temperatūroje. Džiovinto ekstrakto išeiga iš neapdorotų pradinių medžiagų buvo 48,13 % (m/m).
Chromatografinė analizė atlikta naudojant HPLC sistemą („Waters Co.“, Milfordas, MA, JAV) ir fotodiodų matricos detektorių. SDE HPLC analizei atlikti pirminisO-gliukozilcimifugino standartas buvo įsigytas iš Korėjos tradicinės medicinos pramonės skatinimo instituto (Gyeongsanas, Korėja) irsek-O-gliukozilhamaudolio ir 4′-O-β-D-gliukozil-5-O1-metilvisaminolis buvo išskirti mūsų laboratorijoje ir identifikuoti spektrinės analizės būdu, daugiausia BMR ir MS metodais.
SDE mėginiai (0,1 mg) buvo ištirpinti 70 % etanolyje (10 ml). Chromatografinis atskyrimas atliktas naudojant „XSelect HSS T3 C18“ kolonėlę (4,6 × 250 mm, 5μm, „Waters Co.“, Milfordas, MA, JAV). Mobiliąją fazę sudarė acetonitrilas (A) ir 0,1 % acto rūgšties tirpalas vandenyje (B), srauto greitis buvo 1,0 ml/min. Naudota daugiapakopė gradiento programa: 5 % A (0 min.), 5–20 % A (0–10 min.), 20 % A (10–23 min.) ir 20–65 % A (23–40 min.). Detekcijos bangos ilgis buvo nuskaitytas esant 210–400 nm, o registruojamas esant 254 nm. Įpurškimo tūris buvo 10,0μL. Standartiniai tirpalai trijų chromonų nustatymui buvo paruošti, kurių galutinė koncentracija buvo 7,781 mg/ml (pirm.O-gliukozilcimifuginas), 31,125 mg/ml (4′-)O-β-D-gliukozil-5-O-metilvisaminolis) ir 31,125 mg/ml (sek-O-gliukozilhamaudolis) metanolyje ir laikomas 4 °C temperatūroje.
RAW 264.7 ląstelės buvo gautos iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC, Manasas, Virdžinija, JAV) ir auginamos DMEM terpėje, kurioje yra 1 % antibiotikų ir 5,5 % FBS. Ląstelės buvo inkubuojamos drėgnoje 5 % CO2 atmosferoje 37 °C temperatūroje. Ląstelėms stimuliuoti terpė buvo pakeista šviežia DMEM terpe ir lipopolisacharidu (LPS, „Sigma-Aldrich Chemical Co.“, Sent Luisas, Misūris, JAV) 1μµg/ml buvo pridėta su SDE (200 arba 400) arba be joμg/ml) dar 24 val.
2.3.2. Azoto oksido (NO), prostaglandino E2 (PGE2), naviko nekrozės faktoriaus nustatymasα(TNF-α) ir interleukino-6 (IL-6) gamyba
Ląstelės buvo apdorotos SDE ir stimuliuojamos LPS 24 val. NO gamyba buvo analizuojama matuojant nitritus naudojant Griesso reagentą pagal ankstesnį tyrimą [12Uždegiminių citokinų PGE2, TNF- sekrecijaα, o IL-6 buvo nustatytas naudojant ELISA rinkinį („R&D systems“) pagal gamintojo instrukcijas. SDE poveikis NO ir citokinų gamybai buvo nustatytas esant 540 nm arba 450 nm bangos ilgiui, naudojant „Wallac EnVision“.™mikroplokštelių skaitytuvas („PerkinElmer“).
2.4. Antiosteoartritinio aktyvumo įvertinimasIn vivo
2.4.1. Gyvūnai
Sprague-Dawley žiurkių patinėliai (7 savaičių amžiaus) buvo įsigyti iš „Samtako Inc.“ (Osanas, Korėja) ir laikomi kontroliuojamomis sąlygomis, naudojant 12 val. šviesos ir tamsos ciklą.°C ir% drėgmės. Žiurkėms buvo duodamas laboratorinis pašaras ir vanduo.neribotaiVisos eksperimentinės procedūros buvo atliktos laikantis Nacionalinių sveikatos institutų (NIH) gairių ir patvirtintos Tedžono universiteto (Tedžonas, Korėjos Respublika) Gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto.
2.4.2. OA sukėlimas žiurkėms su MIA
Prieš pradedant tyrimą, gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į gydymo grupes (vienai grupei). MIA tirpalas (3 mg/50μĮ dešiniojo kelio sąnario tarpą, taikant ketamino ir ksilazino mišinio anesteziją, buvo tiesiogiai sušvirkšta 0,9 % fiziologinio tirpalo. Žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į keturias grupes: (1) fiziologinio tirpalo grupė be MIA injekcijos, (2) MIA grupė su MIA injekcija, (3) SDE gydyta grupė (200 mg/kg) su MIA injekcija ir (4) indometacinu (IM) gydyta grupė (2 mg/kg) su MIA injekcija. Žiurkėms buvo skiriamas per burną SDE ir IM 1 savaitę prieš MIA injekciją 4 savaites. Šiame tyrime naudota SDE ir IM dozė buvo pagrįsta ankstesniuose tyrimuose naudotomis dozėmis [10,13,14].
Po osteoartrito sukėlimo buvo sutrikdyta pradinė užpakalinių letenų svorio laikymo gebėjimo pusiausvyra. Svorio laikymo tolerancijos pokyčiams įvertinti buvo naudojamas nepajėgumo testeris („Linton instrumentation“, Norfolkas, JK). Žiurkės buvo atsargiai įdėtos į matavimo kamerą. Užpakalinės galūnės veikiama svorio laikymo jėga buvo vidurkinama per 3 s laikotarpį. Svorio pasiskirstymo santykis buvo apskaičiuotas pagal šią lygtį: [dešinės užpakalinės galūnės svoris / (dešinės užpakalinės galūnės svoris + kairiosios užpakalinės galūnės svoris)] × 100 [15].
2.4.4. Serumo citokinų lygių matavimai
Kraujo mėginiai buvo centrifuguojami 1500 g greičiu 10 min. 4 °C temperatūroje; tada serumas buvo surinktas ir laikomas –70 °C temperatūroje iki naudojimo. IL-1 kiekisβ, IL-6, TNF-αir PGE2 kiekis serume buvo išmatuotas naudojant ELISA rinkinius iš „R&D Systems“ (Mineapolis, MN, JAV) pagal gamintojo instrukcijas.
2.4.5. Kiekybinė realaus laiko RT-PGR analizė
Bendra RNR buvo išskirta iš kelio sąnario audinio naudojant TRI reagentą® (Sigma-Aldrich, Sent Luisas, Misūris, JAV), atvirkščiai transkribuota į kDNR ir PGR amplifikuota naudojant TM One Step RT PGR rinkinį su SYBR žalia spalva (Applied Biosystems, Grand Island, NY, JAV). Realaus laiko kiekybinė PGR buvo atlikta naudojant „Applied Biosystems 7500 Real-Time PGR“ sistemą (Applied Biosystems, Grand Island, NY, JAV). Pradmenų sekos ir zondo seka pateiktos lentelėje.1Mėginio kDNR alikvotinės dalys ir toks pat GAPDH kDNR kiekis buvo amplifikuoti naudojant „TaqMan® Universal“ PGR pagrindinį mišinį, kuriame buvo DNR polimerazė, pagal gamintojo instrukcijas („Applied Biosystems“, Fosteris, Kalifornija, JAV). PGR sąlygos: 2 min. 50 °C temperatūroje, 10 min. 94 °C temperatūroje, 15 s 95 °C temperatūroje ir 1 min. 60 °C temperatūroje, 40 ciklų. Tikslinio geno koncentracija buvo nustatyta naudojant lyginamąjį Ct (slenksčio ciklų skaičius kryžminimo taške tarp amplifikacijos grafiko ir slenksčio) metodą, pagal gamintojo instrukcijas.
Osteoartritas (OA) yra dažniausias raumenų ir skeleto sistemos sutrikimas ir dažniausia degeneracinė sąnarių liga vyresnio amžiaus žmonėms [1OA yra būklė, kurią iš dalies sukelia trauma, kremzlės struktūros ir funkcijos praradimas bei uždegiminių ir priešuždegiminių takų disreguliacija [2,3Jis pirmiausia pažeidžia sinovinių sąnarių sąnarinę kremzlę ir subchondrinį kaulą ir sukelia sąnarių nepakankamumą, dėl kurio atsiranda skausmas nešant svorį, įskaitant vaikščiojimą ir stovėjimą [4].
OA išgydyti neįmanoma, nes labai sunku atkurti kremzlę, kai ji sunaikinama [5Gydymo tikslai yra malšinti skausmą, palaikyti arba pagerinti sąnarių judrumą, padidinti sąnarių stiprumą ir sumažinti ligos sukeliamą negalią sukeliantį poveikį. Farmakologinis OA gydymas siekia sumažinti skausmą, siekiant pagerinti paciento sąnarių funkciją ir gyvenimo kokybę. Nors kremzlės irimas yra pagrindinis OA įvykis, kolageno skaidymas yra esminis įvykis, lemiantis negrįžtamą OA progresavimą kartu su uždegimu [6,7Tikimasi, kad gydymas priešuždegiminiu ir chondroprotekciniu poveikiu malšins skausmą ir palaikys matricos vientisumą OA sergantiems pacientams.
Todėl uždegimo mažinimas greičiausiai bus naudingas gydant osteoartritą (OA). Naujausi tyrimai rodo, kad vaistažolių ištekliai atlieka apsauginį vaidmenį OA progresavimui, mažinant chondrocitų uždegimą ir tolesnį kremzlės irimą dėl jų gebėjimo sąveikauti su sąnariais susijusiais audiniais, todėl sumažėja sąnarių skausmas [.8].
ŠaknisSaposhnikovia divaricataKorėjoje ir Kinijoje skėtiniai augalai (angl. Umbelliferae) buvo plačiai naudojami tradicinėje medicinoje galvos skausmui, skausmui, uždegimui ir artritui gydyti.9,10Įvairus farmakologinis poveikisSaposhnikovia divaricata(SD) taip pat pasižymi priešuždegiminėmis, analgezinėmis, karščiavimą mažinančiomis ir antiartritinėmis savybėmis [9,11Naujausi tyrimai parodė, kad SD chromono ekstraktas turi potencialų antireumatoidinį poveikį kolageno sukelto artrito pelių modelyje [10]; tačiau atlikta nedaug tyrimų, patvirtinančių priešuždegiminį ir antiartritinį aktyvumąSaposhnikovia divaricataekstraktas (SDE).
Todėl šiame tyrime buvo tiriamas 70 % etanolio ekstrakto SD priešuždegiminis ir priešosteoartritinis aktyvumas. Pirmiausia buvo įvertintas SDE priešuždegiminis poveikis.in vitroLPS sukeltose RAW 264.7 ląstelėse. Toliau SDE antiosteoartritinis poveikis buvo matuojamas įvertinant svorio pasiskirstymą, sąnarinės kremzlės irimą ir uždegimines reakcijas žiurkių mononatrio jodoacetato (MIA) sukelto OA modelyje.